Neospora caninum e toxoplasma gondii: revisão de literatura / Neospora caninum and toxoplasma gondii: review of literature / Neospora caninum y toxoplasma gondii: revisión de literatura

A Neospora caninum e a Toxoplasma gondii são os agentes etiológicos que causam a Neosporose e a Toxoplasmose, respectivamente. Estas duas doenças são consideradas de grande importância econômica e de distribuição mundial, que acometem tanto animais de produção quanto animais domésticos. Apresentam sinais clínicos inespecíficos, sendo a Neosporose frequentemente associada ao abortamento em fêmeas. Ambas enfermidades costumavam ser confundidas, dificultando o diagnóstico. São causadas por protozoários cosmopolitas de ciclos biológicos heteróxenos. O Toxoplasma gondii é responsável por doença clínica em cães e gatos, enquanto o Neospora caninum acomete somente cães. Além disso, não há, até o momento, relatos de Neosporose em humanos, diferente da Toxoplasmose. Ocasionalmente esta pode ocorrer em coiotes, suínos, ovinos, caprinos, equinos, cervídeos e bubalinos. Anticorpos contra Neospora tem sido descrito em raposas, camelos e felídeos. O objetivo da presente revisão, é elucidar a forma de transmissão, sinais clínicos, diagnóstico, tratamento e controle de ambas as doenças, mostrando suas semelhanças, afim de que se possa diagnosticá-las corretamente.(AU)

Neospora caninum and toxoplasma gondii are agents of great economic importance and worldwide distribution that affect production and domestic animals. They present nonspecific clinical signs, and neosporosis is a disease that frequently causes abortion in females, which is considered current, because both used to be confused, making diagnosis difficult. They are protozoan, cosmopolitan, of heterogeneous biological cycles. Toxoplasma gondii is responsible for clinical disease in dogs and cats, while Neospora caninum affects only dogs. Furthermore, there are no reports to date of neosporosis in humans, other than toxoplasmosis. Occasionally it may occur in coyotes, pigs, sheep, goats, horses, deer, and bubaline. Antibodies to Neospora have been described in foxes, camels, and felids. This review aims to elucidate the transmission, clinical signs, diagnosis, treatment, and control of both diseases, showing their similarities, so that they can be correctly diagnosed.(AU)

Neospora caninum y Toxoplasma gondii son los agentes etiológicos que causan Neosporosis y Toxoplasmosis, respectivamente. Estas dos enfermedades se consideran de gran importancia económica y de distribución mundial, afectando tanto al ganado como a los animales domésticos. Presentan signos clínicos inespecíficos y la neosporosis se asocia con frecuencia al aborto en mujeres. Ambas dolencias solían ser erróneas, lo que hacía difícil el diagnóstico. Son causados por protozoos cosmopolitas de ciclos biológicos heterogéneos. Toxoplasma gondii es responsable de enfermedades clínicas en perros y gatos, mientras que Neospora caninum sólo ataca a perros. Además, no se han notificado casos de Neosporosis en humanos hasta el momento, diferente de Toxoplasmosis. Ocasionalmente esto puede ocurrir en coyotes, cerdos, ovejas, cabras, caballos, ciervos y bubalinos. Se han notificado anticuerpos contra la Neospora en zorros, camellos y felinos. El propósito de esta revisión es dilucidar la forma de transmisión, los signos clínicos, el diagnóstico, el tratamiento y el control de ambas enfermedades, mostrando sus similitudes, de manera que puedan ser diagnosticadas correctamente.(AU)

Serological survey of Neospora caninum and Toxoplasma gondii in shelter-housed cats infected with feline immunodeficiency virus, Brazil / Inquérito sorológico para Neospora caninum e Toxoplasma gondii em um abrigo de gatos infectados com o vírus da imunodeficiência felina, Brasil

Felines play a leading role in the epidemiology of Toxoplasma gondii infection, but there is scarce information about the epidemiology of Neospora caninum, particularly in feline immunodeficiency virus (FIV)-infected cats. Cats seropositive to T. gondii do not usually show symptoms unless they are immunosuppressed, such as FIV-infected cats. The same relationship remains poorly known for N. caninum, although it has been associated with neurological disorders in HIV-infected people. Since FIV-infected cats are prone to develop encephalitis of unknown etiology, this study aimed to evaluate the presence of specific antibodies to T. gondii and N. caninum in a shelter for stray cats naturally infected with FIV. A total of 104 serum samples from cats living in a shelter, located in São Paulo city (Brazil), was assessed for T. gondii and N. caninum specific antibody by indirect fluorescent-antibody test (IFAT). Of the 104 cats, 25 (24%) were infected with FIV and, aside from these, 8 (32%) had antibodies against T. gondii (titers from 16 to 128). Only 1 (4%) of the FIV-infected cats had antibodies against N. caninum, which was the first record of coinfection. Among the FIV-naïve cats, 11 (14%) were positive for T. gondii(titers from 16 to 256) and only 1 (1.2%) had antibodies against N. caninum. Serologically positive reactions to T. gondii and N. caninum were not correlated with age or sex (p>0.05), and there was no correlation between FIV and the occurrence of anti-T. gondii or anti-N. caninum antibodies (p>0.05). Further studies encompassing larger cat populations from different origins and locations are essential to clarify the prevalence of T. gondii and N. caninum antibodies in FIV-positive cats.(AU)

Os felinos têm um papel importante na epidemiologia da infecção por Toxoplasma gondii, mas pouco se sabe sobre a epidemiologia da infecção por Neospora caninum em gatos, particularmente em gatos infectados com o vírus da imunodeficiência felina (FIV). Gatos soropositivos para Toxoplasma gondii geralmente não apresentam sintomas a não ser que estejam imunossuprimidos, como gatos infectados com FIV. A mesma relação ainda é pouco conhecida para N. caninum, embora tenha sido associada a distúrbios neurológicos em pessoas infectadas pelo HIV. Considerando que gatos infectados com FIV são propensos a desenvolver encefalite de etiologia desconhecida, o presente estudo teve como objetivo avaliar a presença de anticorpos específicos para T. gondii e N. caninum em gatos infectados com FIV. Um total de 104 amostras de soro de gatos residentes em um abrigo na cidade de São Paulo, Brasil, foram avaliadas para a presença de anticorpos contra T. gondii e N. caninum pelo teste de imunofluorescência indireta (RIFI). Dos 104 gatos, 25 (24%) estavam infectados com FIV e destes 8, (32%) tinham anticorpos contra T. gondii (titulação entre 16 e 128). Apenas 1 (4%) dos gatos infectados com FIV apresentava anticorpos contra N. caninum, sendo este o primeiro registro dessa coinfecção. Entre os gatos não infectados com FIV, 11 (14%) foram positivos para T. gondii (titulação entre 16 e 256) e apenas 1 (1,2%) tinha anticorpos contra N. caninum. A reação sorologicamente positiva para T. gondii e N. caninum não foi correlacionada com a idade ou sexo (p> 0,05), nem houve correlação entre FIV e ocorrência de anticorpos para T. gondii ou N. caninum(p> 0,05). Estudos subsequentes abrangendo populações maiores de gatos de diferentes origens e locais são essenciais para esclarecer a prevalência de anticorpos contra T. gondii e N. caninum em animais acometidos por FIV.(AU)

Prevalencia sérica de Neospora caninum y factores de riesgo asociados a su transmisión en tambos de la provincia de Salta, Argentina / Seroprevalence and risk factors associated with Neospora caninum in dairy farms from the Province of Salta, Argentina

Resumen El objetivo de este trabajo fue conocer la seroprevalencia de Neospora caninum en los bovinos de los tambos del Valle del Lerma (Salta, Argentina) y los factores de riesgo asociados a la transmisión de este parásito en esta región. Se tomaron muestras de suero de aproximadamente 40 vacas en cada tambo, que fueron analizadas por ELISA indirecto para detectar anticuerpos contra N. caninum. También se discriminó entre infecciones crónicas y agudas midiendo la avidez de dichos anticuerpos. Todos los tambos presentaron al menos un bovino seropositivoy la media fue de 35,3 ± 14,9% de animales positivos. También se detectaron anticuerpos específicos en caninos presentes en 9 de los 16 tambos, con un valor de seropositi- vidad del 71,7 ± 19,9%. El 56,3% de los bovinos seropositivos cursaban infecciones agudas. Se halló una asociación negativa entre la seroprevalencia y el índice de avidez de los anticuerpos específicos, lo que indica que la presencia de animales con infecciones agudas se asocia a mayor seroprevalencia. Los campos con pastoreo presentaron mayor cantidad de infecciones recien tes. Estos resultados revelan por primera vez la importancia de este parásito en los tambos de la región y la necesidad de propiciar el desarrollo de programas de control considerando los distintos factores de riesgo que afectan la situación epidemiológica de la enfermedad.

Abstract The objective of this work was to determine the seroprevalence of Neospora caninum in cattle in Valle de Lerma, province of Salta, Argentina, and the risk factors associated with the disease. Serum samples were taken from 40 cows in each dairy herd, which were analyzed by indirect ELISA to detect antibodies against N. caninum. Chronic and acute infections were discriminated by measuring the avidity of these antibodies. All the herds exhibited at least one seropositive animal, the mean being 35.3 ± 14.9% of positive animals. Specific antibodies were also detected in dogs present in 9of the herds, which showed a seropositivity value of 71.7% ± 19.9%. Among the seropositive animals, 56.3% showed acute infections. A negative association was found between seroprevalence and the avidity index of specific antibodies, indicating that the presence of animals with acute infections is associated with higher seroprevalence. Fields with grazing showed more recent infections. These results show for the first time the importance of this parasite in this particular region and the need to promote the development of control programs considering the different risk factors that affect the epidemiological situation of the disease.

Occurrence of IGG antibodies anti-TOXOPLASMA GONDII and NEOSPORA CANINUM in cattle raised in family agricultural properties in Realeza, Parana, Brazil

This cross-sectional study evaluates the presence of antibodies against Neospora caninum and Toxoplasma gondii in cattle raised in Realeza, PR. There was a seroprevalence of N. caninum and T. gondii of 87.5% and 67.9%, respectively in the properties assessed. The frequencies of T. gondii and N. caninum in the animals were 41.1% and 55.1%, respectively. The studied coccidia are widely distributed in dairy cows reared on family farms in the municipality of Realeza, PR. Sanitary control for reproductive diseases must be adopted to prevent miscarriages and the economic damage caused by the disease. Future studies should be performed to investigate how widespread these pathogens are in cattle herds in southwestern Parana.

Anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state, South Brazil: prevalence and associated factors / Anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em ovinos do estado do Paraná, sul do Brasil: prevalência e fatores associados

Abstract The aim of this study was to evaluate the seroprevalence and factors associated with the presence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state. The detection of antibodies for T. gondii and N. caninum was performed by homemade and commercial indirect ELISA, respectively. Multiple logistic regression analysis was used to verify the factors associated with the seroprevalence. Antibodies anti-T. gondii and anti-N. caninum were observed in 42.7% and in 17.6% of the animals, respectively. The protective factors associated to seropositive were "some level of confinement" (full or semi-extensive confinement) (OR=0.53) for T. gondii and "use of skilled labor" (OR=0.64) for N. caninum. The risk factors were "presence of cats" (OR=1.75) for T. gondii and "feeding of dogs with sheep placental remains" (OR=1.79) for N. caninum. In addition, to presenting a significant and simultaneous seroprevalence for both agents (9.9% of the animals), the results also indicate that deficiencies in management and environmental sanitation, the presence of reservoirs, and types of exploitation enhance the seropositivity. Thus, studies like this might support sanitary programs and public policies for the prevention of T. gondii and N. caninum in the sheep herds of Paraná state.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos do Paraná. A detecção dos anticorpos para T. gondii e N. caninum foi realizada, usando-se testes de ELISA indireto caseiro e comercial, respectivamente. A análise de regressão logística múltipla foi usada para verificar os fatores de risco associados à soroprevalência. Anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum foram observados em 42,7% e em 17,6% dos animais, respectivamente. Os fatores de proteção associados à soropositividade foram "algum nível de confinamento (confinamento ou semiextensivo)" (OR=0,53) para T. gondii e "presença de mão de obra especializada" para N. caminum (OR=0,64). Os fatores de risco foram "presença de gatos" para T. gondii (OR=1,75) e "alimentação de cães com resíduos placentários" (OR=1,79) para N. caninum. Além de apresentar uma significante e simultânea soroprevalência para ambos os agentes (9,9% dos animais), os resultados também indicam que as deficiências em gestão e saneamento ambiental, a presença de reservatórios e os tipos de exploração favorecem a soropositividade. Dessa forma, estudos como estes podem auxiliar em programas sanitários e políticas públicas para a prevenção de T. gondii e N. caninum nos rebanhos ovinos do Paraná.

An abortion storm in dairy cattle associated with neosporosis in southern Brazil / Um surto de abortamento em vacas leiteiras associado com neosporose no sul do Brasil

Abstract Between December 2016 and April 2017, a spate of abortions occurred in a closed dairy herd from the central eastern region of Paraná, Brazil, in which 75 cows aborted. To identify its cause, organ fragments were collected from an aborted fetus for histopathology, and the blood samples from a stillborn, 4 aborted fetuses, and 9 farm dogs for indirect fluorescent antibody technique (IFAT). These tests found multifocal non-suppurative encephalitis, periportal hepatitis, and multifocal lymphoplasmacytic myocarditis, and detected anti-Neospora antibodies in all aborted fetuses, and in 5 of the 9 dogs. DNA of Neospora caninum was detected in the brain tissue of an aborted fetus. Blood samples of 340 cows and 146 heifers showed 33.5% and 30.8% seropositivity, respectively. In this closed herd, the parasite was probably introduced by infected domesticated or wild carnivores inhabiting the farm, through the infective oocysts present in their stool.

Resumo Um surto de abortamento com 75 abortos ocorreu em um rebanho fechado de vacas leiteiras da região centro Leste do Paraná entre dezembro e abril de 2017. Para chegar ao diagnóstico, fragmentos de órgãos foram coletados de um feto abortado e submetidos para histopatologia; e amostras de sangue foram coletadas de 1 natimorto, de 4 fetos abortados e de 9 cães da propriedade, para detecção de anticorpos pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram encontradas encefalite multifocal não supurativa, hepatite periportal e miocardite linfoplasmocitária multifocal. Anticorpos anti-Neospora foram detectados em todos os fetos abortados e em 5 dos 9 cães. DNA de N. caninum foi detectado no tecido cerebral de um dos fetos abortados. Amostras sanguíneas de 340 vacas e 146 novilhas mostraram uma soropositividade para N. caninum de 33,5% e 30,8%, respectivamente. Nesse rebanho fechado, o parasita foi introduzido possivelmente pelas fezes de cães domésticos ou selvagens infectados que habitam a propriedade.

Neospora caninum infection in cattle in the state of Amazonas, Brazil: seroprevalence, spatial distribution and risk factors / Infecção por Neospora caninum em bovinos no estado do Amazonas, Brasil: soroprevalência, distribuição espacial e fatores de risco

Abstract Livestock in the Amazon has grown significantly and, although neosporosis in cattle has been reported worldwide, there is no information about N. caninum in production systems in the state of Amazonas. The objective of this study was to determine the prevalence of anti-Neospora caninum antibodies in cattle, their spatial distribution and the risk factors associated with N. caninum infection in the state of Amazonas. Questionnaires were applied to farmers to assess risk factors associated with N. caninum infection. Blood samples were collected from 1,073 animals on 47 farms in 33 municipalities in the four Amazonian subpopulations. IgG anti-N.caninum antibodies were detected by the indirect fluorescence test, with a general prevalence of 30.2%, being seropositive in 43 farms (91.5%), with prevalence ranging from 2.2% to 69.2%. The highest number of high density points was found in subpopulation 3 (municipality of Apuí and other municipalities on the Madeira River and affluent). It was concluded that N. caninum is present with high seroprevalence values, when compared to other cattle producing states in the Amazon region of Brazil. The identified factors can be used as risk indicators so that control measures can be implemented to prevent infection by N. caninum in these herds.

Resumo A pecuária na Amazônia tem crescido significativamente e, embora a neosporose em bovinos tenha sido relatada em todo o mundo, não há informações sobre N. caninum nos sistemas de produção no estado do Amazonas. Objetivou-se determinar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos, sua distribuição espacial e os fatores de risco associados à infecção por N. caninum no estado do Amazonas. Questionários foram aplicados aos fazendeiros, para avaliar fatores de risco associados à infecção por N. caninum. Amostras de sangue foram coletadas de 1.073 animais em 47 fazendas, em 33 municípios das quatro subpopulações amazonenses. Anticorpos IgG anti-N.caninum foram detectados pelo teste de imunofluorescência indireta, com prevalência geral de 30,2%, com soropositividade em 43 fazendas (91,5%), com prevalência variando de 2,2% a 69,2%. O maior número de pontos de alta densidade foi encontrado na subpopulação 3 (município de Apuí e demais municípios do rio Madeira e afluentes). Concluiu-se que N. caninum está presente com altos valores de soroprevalência, quando comparado a outros estados produtores de gado na região amazônica do Brasil. Os fatores identificados podem ser usados como indicadores de risco, para que medidas de controle possam ser implementadas para prevenir a infecção por N. caninum nesses rebanhos.

Risk factor analysis associated with Neospora caninum in dairy cattle in Western Brazilian Amazon / Análises de fatores de risco associado a Neospora caninum em gado leiteiro na Amazônia Ocidental Brasileira

Abstract Neospora caninum is considered to be one of the main causes of abortion among cattle. The present survey was conducted in the municipality of Rolim de Moura, Rondônia State, Brazil. A questionnaire that investigates the epidemiological aspects of neosporosis was used in the analysis of risk factors associated with the animal-level and herd-level prevalence in dairy cattle. A total of 416 bovine blood samples were collected from 30 farms, and N. caninum antibody levels were measured by Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT). Analysis of dairy cattle serum samples revealed the presence of anti-N. caninum antibodies to be 47.36% (n = 197). Risk factors associated with N. caninum infection were the management system and access locations of dogs. The results of the present survey indicated that infection of dairy cattle with N. caninum is widespread in the studied region of Western Amazon, which has implications for prevention and control of neosporosis in this region. Therefore, integrated control strategies and measures are recommended to prevent and control N. caninum infection in dairy cattle. In addition, direct contact between dairy cattle, dogs and wild animals, which can influence the epidemiology of neosporosis, should be investigated further.

Resumo A infecção por Neospora caninum é considerada uma das principais causas de aborto entre bovinos. Esta pesquisa foi realizada no município de Rolim de Moura, estado de Rondônia, Brasil. Um questionário que investiga os aspectos epidemiológicos da neosporose foi utilizado na análise dos fatores de risco associados à prevalência em animais e em rebanhos. Um total de 416 amostras de sangue bovino foi colhido em 30 fazendas, e os níveis de anticorpos de N. caninum foram mensurados pela reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). A análise das amostras mostrou prevalência de anticorpos contra N. caninum de 47,36% (n = 197). Os fatores de risco associados à infecção por N. caninum foram o sistema de manejo e os locais de acesso dos cães. Os resultados da presente pesquisa indicam que a infecção de bovinos leiteiros com N. caninum está disseminada na região estudada da Amazônia Ocidental, o que tem implicações para a prevenção e controle da neosporose nessa região. Portanto, estratégias e medidas de controle integrado são recomendadas para prevenir e controlar a infecção por N. caninum em gado leiteiro. Além disso, o contato íntimo entre gado leiteiro, cães e animais selvagens, pode influenciar a epidemiologia da neosporose e deve ser investigada mais detalhadamente.

Atovaquone, chloroquine, primaquine, quinine and tetracycline: antiproliferative effects of relevant antimalarials on Neospora caninum / Atovaquona, cloroquina, primaquina, quinino e tetraciclina: efeitos antiproliferativos de antimaláricos relevantes em Neospora caninum

Abstract Neospora caninum is an apicomplexan parasite that causes abortion in cattle, resulting in significant economic losses. There is no commercial treatment for neosporosis, and drug repositioning is a fast strategy to test possible candidates against N. caninum. In this article, we describe the effects of atovaquone, chloroquine, quinine, primaquine and tetracycline on N. caninum proliferation. The IC50 concentrations in N. caninum were compared to the current information based on previous studies for Plasmodium and Toxoplasma gondii, correlating to the described mechanisms of action of each tested drug. The inhibitory patterns indicate similarities and differences among N. caninum, Plasmodium and T. gondii. For example, atovaquone demonstrates high antiparasitic activity in all the analyzed models, while chloroquine does not inhibit N. caninum. On the other hand, tetracycline is effective against Plasmodium and N. caninum, despite its low activity in T. gondii models. The repurposing of antimalarial drugs in N. caninum is a fast and inexpensive way to develop novel formulations using well-established compounds.

Resumo Neospora caninum é um parasita Apicomplexa relacionado a abortos no gado bovino, que resultam em impactos econômicos. Não há tratamento comercial para neosporosis e o reposicionamento de drogas indica uma estratégia rápida para testar candidatos anti-N. caninum. Neste artigo, são descritos os efeitos da atovaquona, cloroquina, quinino, primaquine e tetraciclina na proliferação de N. caninum. As concentrações IC50 em N. caninum foram comparadas com a informação disponível, baseada em estudos publicados previamente para Plasmodium e Toxoplasma gondii, incluindo a correlação com os mecanismos de ação descritos para cada droga testada. Os padrões de inibição indicam pontos de similaridades e diferenças entre N. caninum, Plasmodium e T. gondii. Por exemplo, a atovaquona demonstra uma alta atividade antiparasitária em todos os modelos testados, enquanto a cloroquina não inibe N. caninum. Por outro lado, a tetraciclina é efetiva contra Plasmodium e N. caninum, em contraste com a baixa atividade em modelos de T. gondii. O reposicionamento de drogas antimaláricas em N. caninum é uma forma rápida e de baixo custo para o desenvolvimento de novas formulações que usam compostos bem estabelecidos.

Occurrence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in pigs in the State of Pará, Brazil / Ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em suínos no estado do Pará, Brasil

Abstract We investigated the occurrence of Toxoplasma gondii and Neospora caninum antibodies in pigs raised in the Northeast of Pará, Brazil. At Study I, convenience sampled 151 pigs at two slaughterhouses, with and without state inspection; and Study II, which assessed 159 pigs with probabilistic sampling from nine pig farms. Serological analysis was performed using indirect fluorescent antibody test for T. gondii and N. caninum with a cutoff of 64 and 50, respectively. Overall, 6.77% pigs were seropositive for T. gondii and 5.16% for N. caninum. In Study I, pigs slaughtered with and without state inspection presented similar occurrence for both coccidia (p>0.05). Study II found an association between N. caninum seropositivity and sludge discarded into the soil, feeding pigs with animal-based protein, subsistence system, and absence of nipple drinkers. No association was found for T. gondii. Pigs from Pará are a potential source of T. gondii infection to humans. To our best knowledge, this is the first study to report anti-N. caninum antibodies in the serum of pigs in Pará State, Brazilian Amazon.

Resumo Foi investigada a ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em suínos criados no nordeste do Pará, Brasil. No Estudo I, foram amostrados 151 porcos em dois matadouros, com e sem inspeção estadual. O Estudo II avaliou 159 suínos com amostragem probabilística de nove granjas de suínos. Para sorologia, utilizou-se o teste de imunofluorescência indireta para T. gondii e N. caninum com ponto de corte de 1:64 e 1:50, respectivamente. No geral, 6,77% dos suínos foram soropositivos para T. gondii e 5,16% para N. caninum. No Estudo I, suínos abatidos em matadouros com e sem inspeção estadual apresentaram ocorrência semelhante para ambos os coccídios (p> 0,05). Os animais amostrados de Belém, Benevides, Marituba, Bujaru, Castanhal e Igarapé-Miri foram positivos para T. gondii, enquanto os soropositivos para N. caninum foram encontrados em Belém, Bujaru, Castanhal e Santo Antônio do Tauá. O Estudo II encontrou associação entre soropositividade de N. caninum e esterco descartado no solo, alimentação dos suínos com proteína de origem animal, criação de subsistência e ausência de bebedores tipo "nipple". Não foi encontrada associação para T. gondii. A carne suína apresenta potencial risco de transmissão de T. gondii para os habitantes da região. De acordo com nosso conhecimento, este é o primeiro relato de anticorpos anti-N. caninum em suínos no estado do Pará, Amazônia brasileira.

Cloning and expression of Neospora caninum rhoptry 2 and its potential as an immunobiological for neosporosis control / Clonagem e expressão de rhoptry 2 Neospora caninum e seu potencial como um imunobiológico para o controle de neosporose

The protozoan Neospora caninum is known worldwide as one of the main causes of abortion in cattle. During infection, rhoptry proteins present in the apical complex of the parasite play important roles in adhesion and parasitophorous vacuole formation. The use of N. caninum ROP2 in experimental vaccines has shown promising protective results. In our study we performed cloning and expression in Escherichia coli of an antigenic portion of N. caninum ROP2. The recombinant protein (rROP2) was obtained in insoluble form, and the purified protein showed a size of approximately 18kDa. Even being a small truncate NcROP2 region, it was possible to conserve the antigenic epitopes which were recognized by bovine serum naturally infected with N. caninum. Vaccination with rROP2 on aluminum hydroxide adjuvant induced high levels of rROP2-specific IgG antibodies capable of recognizing native protein in tachyzoite lysates. In conclusion, our approaches were effective in obtaining the rROP2 protein, which induced specific mouse immune response and was also recognized by sera from N. caninum naturally infected cattle. These results suggest that it is a promising antigen for the development of neosporosis subunit vaccines as well as a suitable antigen for use in immunodiagnosis.(AU)

O protozoário Neospora caninum é conhecido mundialmente como uma das principais causas de aborto em bovinos. Durante a infecção, as proteínas rhoptry presentes no complexo apical do parasita desempenham papel importante na adesão e formação de vacúolos parasitóforos. O uso de ROP2 de N. caninum em vacinas experimentais tem mostrado resultados de proteção promissores. Em nosso estudo, realizamos a clonagem e expressão em Escherichia coli de uma porção antigênica de N. caninum ROP2. A proteína recombinante (rROP2) foi obtida na forma insolúvel, e a proteína purificada apresentou tamanho aproximado de 18kDa. Mesmo sendo uma pequena região truncada de NcROP2, foi possível conservar os epítopos antigênicos que foram reconhecidos pelo soro de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. A vacinação com rROP2 adsorvida no adjuvante de hidróxido de alumínio induziu altos níveis de anticorpos IgG anti-rROP2, capazes de reconhecer a proteína nativa em lisados de taquizoítos. Em conclusão, nossas abordagens foram eficazes na obtenção da proteína rROP2, que induziu resposta imune específica em camundongos e também foi reconhecida por soros de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. Estes resultados sugerem que rROP2 é um antígeno promissor para o desenvolvimento de vacinas de subunidades de neosporose, bem como um antígeno adequado para uso em imunodiagnóstico.(AU)

Seroprevalences of Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections in Jordanian women who had a recent spontaneous abortion / Soroprevalências de infecções por Toxoplasma gondii e Neospora caninum em mulheres jordanianas que tiveram um aborto espontâneo recente

Abstract This cross-sectional study investigates Toxoplasma gondii and Neospora caninum among 445 recently spontaneously aborted (RSA) Jordanian women using ELISA and indirect fluorescent antibody (at a cut-off value of 1/200) tests, respectively. The type of hospital, age, cat and dog contacts, raw and barbecued meat and wild plant consumption, number of abortions, and stillbirths were tested as independent variables using univariate and multivariate logistic regression analyses. The true seroprevalences were 22.1% for T. gondii-IgG, 22.7% for N. caninum-IgG, 2.6% for T. gondii-IgM, 10.6% for N. caninum-IgM, 0% for T. gondii-IgG and IgM, 6.7% for N. caninum-IgG and IgM, and 4.6% and 0% for both parasite IgG and IgM, respectively. T. gondii-IgM-seropositivity was associated with the number of abortions with odds ratios (OR) of 2.4 and eating barbecued meat (OR = 0.12). N. caninum-IgG-seropositivity was associated with having a dog in the house (OR = 2.6), and with stillbirth (OR = 0.1). N. caninum-IgM was associated with visiting a private-hospital (OR = 2.7). RSA Jordanian women are equally exposed to both parasites with significantly (p < 0.05) higher seroprevalence of N. caninum-IgM compared to T. gondii-IgM suggestive of active infections among RSA women in Jordan.

Resumo Este é um estudo transversal, investigando Toxoplasma gondii e Neospora caninum entre 445 mulheres jordanianas recentemente abortadas espontaneamente (RSA), usando-se ELISA e testes de anticorpos fluorescentes indiretos (com valor de corte de 1/200), respectivamente. Tipo de hospital, idade, contato com o cão, consumo de carne, número de abortos foram testados como variáveis independentes, usando-se análises de regressão logística univariada e multivariada. As verdadeiras seroprevalências foram 22,1% para T. gondii-IgG; 22,7% para N. caninum-IgG; 2,6% para T. gondii-IgM; 10,6% para N. caninum-IgM, 0% para T. gondii-IgG e IgM, 6,7% para N. caninum-IgG e IgM, e 4,6% e 0% para ambos os parasitas IgG e IgM, respectivamente. A soropositividade para T. gondii-IgM foi associada ao número de abortos com "odds ratio" (OR) de 2,4 e ingestão de carne grelhada (OR = 0,12). A soropositividade para N. caninum-IgG foi associada à presença de cachorro em casa (OR = 2,6) e natimorto (OR = 0,1). N. caninum-IgM foi associada à visita a um hospital privado (OR = 2,7). Mulheres jordanianas com RSA estão igualmente expostas a ambos os parasitas com soroprevalência significativamente (p <0,05) maior de N. caninum-IgM, em comparação com T. gondii-IgM, sugestivo de infecções ativas entre mulheres com RSA na Jordânia.

Vertical transmission and kinetic of antibodies anti-Neospora caninum in naturally infected lambs in the semiarid region of Brazil / Transmissão vertical e cinética de anticorpos anti-Neospora caninum em cordeiros naturalmente infectados na região Semiárida do Brasil

Abstract Aimed with this study to evaluate vertical transmission of Neospora caninum in naturally infected sheep and to monitor the kinetics of antibodies against this protozoon in their lambs. Therefore, 48 pregnant ewes, from five herds, were divided into two groups: G1 - positive for anti-N. caninum antibodies, with 19 animals; and G2 - seronegative, with 29 animals. Blood samples were taken from the ewes and their lambs, immediately after birth, before ingesting colostrum, and 2, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days after birth. Analysis on serum antibodies was performed using the indirect immunofluorescent antibody test. Among the 19 seropositive mothers, six (31.6%) gave birth to lambs seropositive before ingesting colostrum and it was found that these lambs remained positive until the end of the study (56 days). Only one of the lambs, from a ewe that presented an antibody titer of 200, seroconverted after ingestion of colostrum. All the lambs that had been born from negative mothers remained negative throughout the experimental period. It was concluded that transplacental transmission was an important form of diffusion of N. caninum in the herds studied and that seropositive lambs maintained circulating antibodies during the period analyzed.

Resumo Objetivou-se avaliar a ocorrência da transmissão vertical de Neospora caninum em ovelhas naturalmente infectadas e monitorar a cinética de anticorpos para esse protozoário nos cordeiros. Portanto, foram selecionadas 48 matrizes prenhes, provenientes de cinco propriedades, e estas foram divididas em dois grupos: G1- 19 matrizes positivas para anticorpos anti-N. caninum antes da prenhez; e G2 - 29 matrizes soronegativas. Foram realizadas colheitas sanguíneas nas mães e cordeiros, no G1 e G2, imediatamente após a parição, antes da ingestão do colostro. Também foi possível realizar colheitas de sangue com 2, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 dias após o nascimento. A pesquisa de anticorpos séricos foi realizada por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Das 19 matrizes soropositivas, seis (31,6%) pariram cordeiros soropositivos antes da ingestão do colostro, os quais mantiveram-se positivos até o final do experimento (56 dias). Apenas um dos cordeiros, filho de uma ovelha com título de anticorpos 200, soroconverteu após ingestão do colostro. Todos os cordeiros, filhos de mães negativas, mantiveram-se negativos durante todo o período experimental. Conclui-se que a transmissão transplacentária é uma importante forma de difusão do N. caninum nos rebanhos estudados e que os descendentes infectados, durante a gestação, mantiveram anticorpos circulantes durante o período analisado.

Association between Neospora caninum seropositivity and reproductive disorders in girolando cows / [Associação entre a soropositividade para Neospora caninum e distúrbios reprodutivos em vacas girolando]

The aim of this study was to investigate the presence of anti-Neospora caninum antibodies in Girolando cows, in order to evaluate the association between seropositivity and reproductive disorders. Blood samples were collected from 40 dairy cows in their reproductive phase from the cranial superficial epigastric vein. The blood samples were tested using the Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT) to detect anti-N.caninum antibodies. The serological results were used to verify whether there was any association with the manifestation of reproductive disorders based on data from the records of reproductive history from 2017 to 2018 as well as the clinical observations of the herd throughout this study. The Fisher exact test was used to verify the existence of an association between the serology and reproductive disorders, adopting a 95% confidence level. The serological results showed a 27.5% seroprevalence in the herd for N. caninum, however, after statistical analysis, no association between seropositivity and reproductive disorders was found in the evaluated herd. Although the studied population is infected with Neospora caninum, we can infer that anti-Neospora caninum antibodies present in Girolando dairy cows at the UFRRJ Dairy Cattle Facility are not associated with the occurrence of reproductive disorders.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a presença de anticorpos anti-Neospora caninum em vacas Girolando, avaliando-se a associação entre a soropositividade e os distúrbios reprodutivos. Foram coletadas amostras de sangue da veia epigástrica superficial cranial de 40 vacas leiteiras em fase reprodutiva, sendo as amostras testadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-N. caninum. A partir dos resultados sorológicos, foi realizada a verificação de associação, ou não, com a manifestação de distúrbios reprodutivos, coletados nos registros de histórico reprodutivo entre 2017 e 2018 e observações do rebanho no transcorrer do estudo. O teste exato de Fisher foi utilizado para verificar a existência de associação entre a sorologia e os distúrbios reprodutivos, adotando-se nível de confiança de 95%. O resultado do estudo demonstrou uma soroprevalência no rebanho de 27,5% para N. caninum, contudo, após análise estatística, não foi confirmada a associação entre soropositividade e distúrbios reprodutivos no rebanho avaliado. Apesar de a população estudada estar infectada com o Neospora caninum, pode-se inferir que anticorpos anti-Neospora caninum presentes em vacas leiteiras Girolando do Setor de Bovinocultura de Leite da UFRRJ não estão associados à ocorrência de distúrbios reprodutivos.(AU)

Neospora caninum DNA distribution in tissues of gerbils as experimental models of chronic neosporosis / [Distribuição do DNA de Neospora caninum em tecidos de gerbilos como modelos experimentais de neosporose crônica]

Neospora caninum is the main etiologic agent of neosporosis in domestic animals and its pathogenesis comprises two characteristic phases: acute and chronic. Rodents are used as experimental models to mimic acute and chronic bovine neosporosis. In this study, we inoculated a total of 27 female gerbils, with different doses of N. caninum tachyzoites aiming to induce chronic disease. DNA was extracted from different organs of each animal after spontaneous death or euthanasia. Encephalic tissues were submitted to a highly sensitive real time PCR aiming to detect chronically infected animals. All the other samples were submitted to standard PCR. A total of 11 gerbils died due to acute neosporosis, as confirmed by N. caninum DNA detection in organs. 5x103 tachyzoites/mL of N. caninum was the dosage of antigen that can induce chronic infection in gerbils. In the encephalon sections of some animals that showed clinical signs of persistent infection, we found 70% positive for the anterior encephalon section, suggesting this area as preferential for cyst formation. Therefore, we determined the doses of tachyzoites that cause acute or chronic infection and detection of positive tissues, preferably, systemic organs during acute and encephalon in chronic phases.(AU)

Neospora caninum é o principal agente etiológico da neosporose em animais domésticos, e sua patogênese compreende duas fases características: aguda e crônica. Roedores são usados como modelos experimentais para simular neosporose bovina aguda e crônica. Neste estudo, foi inoculado um total de 27 gerbilos, fêmeas, com diferentes doses de taquizoítos de N. caninum, visando induzir doença crônica. O DNA foi extraído de diferentes órgãos de cada animal após a morte espontânea ou a eutanásia. Os tecidos encefálicos foram submetidos à PCR em tempo real de alta sensibilidade para detecção de animais com infecção crônica. Todas as outras amostras foram submetidas à PCR padrão. Um total de 11 gerbilos morreu devido à neosporose aguda, como confirmado pela detecção de DNA de N. caninum nos órgãos. A dosagem de antígeno que pode induzir infecção crônica foi de 5x103 taquizoítos/mL de N. caninum. Em seções do encéfalo de alguns animais, que apresentaram sinais clínicos de infecção persistente, encontraram-se 70% de positividade para a seção do encéfalo anterior, sugerindo essa área como preferencial para a formação de cisto. Assim, foram determinadas,, em gerbilos, as dosagens de taquizoítos capazes de induzir infecção crônica ou aguda, bem como foram detectados tecidos positivos, preferencialmente, em órgãos sistêmicos, na fase aguda, e no encéfalo, na crônica.(AU)

Aborto infeccioso por Neospora spp. em equino ˗ relato de caso / [Neospora spp infectious abortion in the horse ˗ case report]

O abortamento na espécie equina é responsável por grandes perdas econômicas e, entre as possíveis causas, está a neosporose, uma enfermidade que nem sempre é investigada como provável diagnóstico. Assim, o objetivo deste trabalho foi relatar um caso de aborto equino aos 129 dias de gestação, resultante da infecção por Neospora spp.. Amostras sanguíneas da égua e do feto abortado foram enviadas para um laboratório especializado. À necrópsia, constatou-se edema gelatinoso e hemorrágico em subcutâneo, fígado ictérico e friável com autólise de alguns órgãos, como baço, rins e glândulas adrenais. Fragmentos dos órgãos coletados na necrópsia foram submetidos à histopatologia e à pesquisa de agentes infecciosos, em que se identificou hepatite e epicardite não purulentas e onfalite purulenta, bem como exame positivo para Neospora spp. pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) convencional e Nested. O soro sanguíneo obtido da égua foi submetido à pesquisa de Neospora spp. pela técnica de imunofluorescência indireta, de herpesvírus por soroneutralização em cultura de células e de Leptospira sp. por PCR, todas com resultados negativos. Dessa forma, é importante considerar a neosporose como diagnóstico diferencial em casos de abortamento e natimortalidade, uma vez que a presença de cães nas propriedades é extremamente comum, representando uma importante fonte de infecção.(AU)

Abortion in the equine species is responsible for major economic losses, and among the possible causes is neosporosis, a disease that is not always investigated as a probable diagnosis. Thus, the objective of this study was to report an abortion at 129 days of gestation resulting from Neospora spp. Blood samples from the mare and the aborted fetus were sent to a specialized laboratory. Under necropsy, gelatinous and hemorrhagic edema was detected in subcutaneous tissue, friable and jaundiced liver with autolysis in spleen, kidneys and adrenal glands. Fragments of the organs collected at necropsy were submitted to histopathology and infectious agent tests, which identified non-purulent hepatitis and epicarditis and purulent omphalitis. Also, a positive result for Neospora spp. by the conventional and nested Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. Blood serum obtained from the mare was subjected to analyses to Neospora spp. by indirect immunofluorescence technique, herpesvirus by serum neutralization in cell culture and Leptospira sp. by PCR, all with negative results. Thus, it is important to consider neosporosis as a differential diagnosis in cases of abortion and stillbirth, since the presence of dogs in the properties is extremely common and represent an important source of infection.(AU)

Co-infection by Neopora caninum and bovine viral diarrhea virus in cattle from Rio Grande do Sul, Brazil, destined to exportation / Coinfecção por Neospora caninum e vírus da diarreia viral bovina em bovinos do Rio Grande do Sul, Brasil, destinados à exportação

Reproductive tests in cattle are of great economic importance, given the impact it can have on the production system and may be caused by agents. Neospora caninum and Bovine Viral Diarrhea virus (BVDV) are considered of great importance as reproductive and should be considered responsible for keeping animals persistently infected. The present study included 479 calf serum samples for export in the state of Rio Grande do Sul (RS). All samples were screened for BVDV by an ELISA antigen. BVDV antigen-positive ELISA samples were isolated from BVDV in cell culture. An indirect immunofluorescence (IFT) technique was used to detect anti-N. caninum antibodies. Of the 479 export-treated serum samples, 361 were positive for BVDV antigens by ELISA and/or viral isolation test (361/479-75.36%), and 109 IFT-positive samples for N. caninum (109/479-22.75%). Despite detection of antibodies anti-N. caninum did not differ statistically between naturally infected BVDV and non-BVDV infected animals suggesting that there is no interference of BVDV infection on infection or detection rate of animals with N. caninum, positive animals in viral isolation and high DO in BVDV-Ag ELISA. may present active disease and consequent immunosuppression, contributing to a potential reactivation of N. caninum.(AU)

Testes reprodutivos em bovinos são de grande importância econômica, dado o impacto que podem ter no sistema de produção e podem ser causados por agentes. O Neospora caninum e o vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV) são considerados de grande importância como reprodutivos e devem ser considerados responsáveis por manter os animais persistentemente infectados. O presente estudo incluiu 479 amostras de soro de bezerro para exportação no estado do Rio Grande do Sul (RS). Todas as amostras foram rastreadas para BVDV por um antígeno ELISA. As amostras de ELISA positivas para o antigénio BVDV foram isoladas a partir de BVDV em cultura de células. Uma técnica de imunofluorescência indireta (IFT) foi utilizada para detectar anticorpos anti-N caninum. Das 479 amostras de soro tratadas para exportação, 361 foram positivas para antígenos de BVDV por ELISA e/ou teste de isolamento viral (361/479-75,36%) e 109 amostras positivas para IFT para N. caninum (109/479-22,75%). Apesar da detecção de anticorpos anti-N. caninum não diferiu estatisticamente entre animais infectados naturalmente BVDV e não BVDV sugerindo que não há interferência da infecção pelo BVDV na infecção ou taxa de detecção de animais com N. caninum, animais positivos em isolamento viral e alta DO em BVDV-Ag ELISA, pode apresentar doença ativa e consequente imunossupressão, contribuindo para uma potencial reativação de N. caninum.(AU)

Causes of abortion in dairy cows in Uruguay / Causas de aborto em bovinos de leite no Uruguai

A case series study was conducted to determine the frequency of causes of abortion in dairy cattle in Uruguay. The sample size of 102 cases was composed of 53 fetuses, 35 fetuses with placentas, and 14 placentas without an associated fetus. All cases underwent gross and microscopic pathologic examinations as well as microbiological and serological testing. The etiology was determined in 54 (53%) of cases, 51 of which were caused by infectious agents. Within the observed 102 cases, 30 (29%) were caused by Neospora caninum, six (6%) by Coxiella burnetii and two (2%) by Campylobacter fetus subsp. venerealis. Bovine Parainfluenza-3 virus and Salmonella enterica serovar Newport caused one abortion each. Opportunistic bacteria (Escherichia coli, Streptococcus sp., Staphylococcus sp., Mannheimia sp., Trueperella pyogenes, and Providencia stuartii) were associated with 11 abortions. In two cases the fetal death was attributed to dystocia, and in one case the fetus had a congenital mesothelioma. Bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection was identified in three fetuses; two of which were co-infected with and had typical lesions of N. caninum. No lesions were observed in the other fetus infected by BVDV. Leptospira interrogans was identified in one fetus without lesions. Despite the relatively low overall success rate in establishing an etiological diagnosis in cases of abortion in cattle, a systemic workup of bovine abortion is necessary to establish prevention and control strategies. This also facilitates monitoring and surveillance of reproductive diseases in dairy cattle, some of which represent a risk to public health.(AU)

Uma série de casos foi estudada para determinar a frequência de causas do aborto em bovinos leiteiros no Uruguai. A amostra, de 102 casos, foi composta por 53 fetos, 35 fetos com placentas e 14 placentas sem feto associado. Todos os casos foram submetidos a exames patológicos macroscópicos e microscópicos, além de testes microbiológicos e sorológicos. A etiologia foi determinada em 54 (53%) dos casos, 51 dos quais foram causados por agentes infecciosos. Nos 102 casos observados, 30 (29%) foram causados por Neospora caninum, seis (6%) por Coxiella burnetii e dois (2%) por Campylobacter fetus subsp. venerealis. O vírus da Parainfluenza-3 e Salmonella enterica serovar Newport causaram um aborto cada. Bactérias oportunistas (Escherichia coli, Streptococcus sp., Staphylococcus sp., Mannheimia sp., Trueperella pyogenes e Providencia stuartii) foram associadas a 11 abortos. Em dois casos, a morte fetal foi atribuída a distocia e, em um caso, o feto apresentava mesotelioma congênito. A infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) foi identificada em três fetos; dois dos quais foram co-infectados e apresentavam lesões típicas de N. caninum. Não foram observadas lesões no outro feto infectado pelo BVDV. Leptospira interrogans foi identificada em um feto sem lesões. Apesar da relativamente baixa taxa de sucesso no diagnóstico etiológico nos casos de aborto em bovinos, é necessário o diagnóstico sistemático dos abortos para estabelecer estratégias de prevenção e controle. Isso também facilita o monitoramento e a vigilância de doenças reprodutivas em bovinos leiteiros, algumas das quais representam um risco para a saúde pública.(AU)

Survey of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona antibodies in wild red-tailed Amazon parrots (Amazona brasiliensis) / Pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e anti-Sarcocystis neurona em papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre

Abstract Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona are obligate intracellular parasites within the phylum Apicomplexa. The red-tailed Amazon parrot (Amazona brasiliensis) is a near-threatened species of psittacine that is endemic to the Atlantic Forest of Brazil and has been designated as a bioindicator because of its sensitivity to environmental qualitative status and changes. The aim of this study was to evaluate the presence of antibodies against T. gondii, N. caninum and S. neurona in wild red-tailed Amazon parrot nestlings on Rasa Island, Brazil. Blood samples were collected from 51 parrots and plasma samples were stored at - 20 °C until immunofluorescence antibody tests (IFAT) were performed. Antigen slides were prepared using tachyzoites of T. gondii (RH strain) and, N. caninum (NC-1 strain) and using merozoites of S. neurona (SNR37 strain). Plasma samples were tested at initial dilutions of 1:16 for T. gondii, 1:50 for N. caninum and 1:5 for S. neurona. An anti-chicken antibody conjugated with FITC was used as a secondary antibody at 1:50 dilution. No antibodies for any of these three protozoa were found, thus suggesting that these wild red-tailed Amazon parrot nestlings had not been exposed to these parasites.

Resumo Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis neurona são protozoários intracelulares do filo Apicomplexa. O papagaio-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) é um psitacídeo endêmico da floresta atlântica, considerado uma espécie quase ameaçada de extinção e bioindicadora por sua sensibilidade às mudanças no ambiente. O objetivo do presente estudo foi detectar a presença de anticorpos contra T. gondii, N. caninum e S. neurona em filhotes de papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre na Ilha Rasa, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 51 papagaios e armazenadas a - 20ºC até a realização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). As lâminas de RIFI com os antígenos, foram preparadas com taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e N. caninum (cepa NC-1) e com merozoítos de S. neurona (cepa SNR37). Os plasmas foram diluídos em PBS (Ph 7,2) nas diluições 1:16 para T. gondii, 1:50 para N. caninum e 1:5 para S. neurona. O conjugado anti-IgG de galinhas marcado com fluoresceína (FITC) foi utilizado na diluição de 1:50. Não foram detectados anticorpos para os três protozoários nas amostras sugerindo que os filhotes de papagaios-de-cara-roxa não foram expostos aos protozoários.